胡朝軍 周仁芳 張蜀瀾 秦曉松 武永康 牛家峰 楊再興 何敏 王春燕 羅靜 黃清水 李晞 張鐵漢 李永哲 選自中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2016,39(11)

抗核抗體(antinuclear antibodies，ANA)是自身免疫病(autoimmune diseases，AID)重要的血清自身抗體，ANA的檢測(cè)結(jié)果對(duì)AID的診療及病情評(píng)估具有重要作用。ANA是以真核細(xì)胞各種成分為靶抗原的非器官特異性自身抗體。自1957年采用間接免疫熒光(indirect immunofluorescence，IIF)法檢測(cè)ANA以來(lái)^[1]，ANA的概念已經(jīng)使用50余年。隨著免疫熒光抗體技術(shù)的改進(jìn)及人源培養(yǎng)細(xì)胞抗原基質(zhì)的廣泛應(yīng)用，目前對(duì)ANA靶抗原的理解已由傳統(tǒng)的細(xì)胞核成分?jǐn)U展到包括細(xì)胞核、細(xì)胞漿、細(xì)胞骨架、細(xì)胞分裂周期蛋白等^[2,3]的整個(gè)細(xì)胞。ANA常用的檢測(cè)方法包括使用純化或重組抗原建立的ANA篩查方法，如ELISA和以HEp－2細(xì)胞為基質(zhì)的IIF法等。前者具有操作簡(jiǎn)單、可實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化等優(yōu)點(diǎn)，但是使用純化或重組抗原檢測(cè)ANA總抗體，存在純化抗原過(guò)程中的抗原性"減弱"或"失活"，或重組抗原的決定簇缺乏部分天然的高級(jí)結(jié)構(gòu)及無(wú)法完全重組全部抗原成分而導(dǎo)致假陰性等缺點(diǎn)。后者由于HEp－2細(xì)胞具有人源性、核抗原種類豐富、特異性強(qiáng)、含量高、核大、細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰、易于結(jié)果觀察及熒光染色模型分析，以及可以檢測(cè)ANA總抗體，因此以HEp－2細(xì)胞為基質(zhì)的IIF法仍然被美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(American College of Rheumatology，ACR)、歐洲自身免疫標(biāo)準(zhǔn)化促進(jìn)會(huì)(European Autoimmunity Standardization Initiative，EASI)等專業(yè)學(xué)會(huì)推薦為ANA檢測(cè)的"參考方法"。

一、抗核抗體HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光模型命名

國(guó)內(nèi)關(guān)于ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光模型介紹的專業(yè)圖譜書(shū)籍較少，目前廣泛使用的兩本圖譜分別為2000年馬東來(lái)主編的《自身抗體及免疫熒光模式》^[4]和2014年李永哲主編的《自身抗體免疫熒光圖譜》^[5]。ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光模型復(fù)雜，各國(guó)學(xué)者多年來(lái)不斷致力于規(guī)范各種熒光模型名稱。2014年8月28日在巴西圣保羅舉行的第12屆國(guó)際自身抗體和自身免疫研討會(huì)上，由來(lái)自15個(gè)國(guó)家的研究機(jī)構(gòu)、臨床醫(yī)生和診斷實(shí)驗(yàn)室的66位專家經(jīng)過(guò)為期1 d的研討，形成ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型命名標(biāo)準(zhǔn)化國(guó)際共識(shí)^[6]。該國(guó)際共識(shí)中將ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型分為3類：細(xì)胞核熒光模型、細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂熒光模型，同時(shí)定義了每種熒光模型，并對(duì)鑒定要點(diǎn)進(jìn)行了詳細(xì)描述。ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型命名：所有HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型都賦予一個(gè)唯一AC(anti－cell)開(kāi)頭的編碼，并登記于ANA熒光模型國(guó)際共識(shí)(international consensus on antinuclear antibody pattern，ICAP)網(wǎng)站(www.ANApatterns.org)，見(jiàn)圖1。ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型結(jié)果回報(bào)：雖然目前絕大多數(shù)的ANA IIF檢測(cè)試劑都采用HEp－2細(xì)胞作為檢測(cè)基質(zhì)，但是個(gè)別ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型在不同廠家檢測(cè)試劑上呈現(xiàn)的熒光模型仍有差別，如棒環(huán)狀熒光模型(rods and rings，RR)，見(jiàn)圖2。鑒于此，并基于2014年的ANA HEp－2細(xì)胞檢測(cè)巴西指南^[7]，該指南為確保具有重要臨床意義的熒光模型被準(zhǔn)確識(shí)別，根據(jù)熒光模型鑒別難易程度不同，將ANA熒光模型分為必報(bào)熒光模型(基礎(chǔ)水平報(bào)告熒光模型)和選報(bào)熒光模型(專家級(jí)水平報(bào)告熒光模型)。該共識(shí)明確指出目前設(shè)置的2大類熒光模型報(bào)告等級(jí)是暫時(shí)的，并且建議具有相應(yīng)能力的自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員盡量報(bào)告專家級(jí)水平熒光模型。

圖1

抗核抗體HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型分類及命名^[6]

二、細(xì)胞核熒光模型

細(xì)胞核熒光模型是指HEp－2細(xì)胞在分裂間期細(xì)胞核熒光染色所顯現(xiàn)的熒光形態(tài)，共包括7種主要核型和12種亞核型，見(jiàn)圖1。臨床診療日常工作中，必報(bào)熒光核型包括：均質(zhì)型(AC－1)、斑點(diǎn)型(AC－2，4，5)、致密斑點(diǎn)型(AC－2)、著絲點(diǎn)型(AC－3)、核點(diǎn)型(AC－6，7)和核仁型(AC8，9，10)；專家級(jí)選報(bào)熒光模型包括：核膜型(AC－11，12)、抗增殖細(xì)胞核抗原型(PCNA型AC－13)及著絲點(diǎn)－F型(AC－14)。

1．均質(zhì)型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿呈均勻熒光染色，通常細(xì)胞核仁區(qū)熒光染色強(qiáng)度與細(xì)胞核漿其他區(qū)域一致，或者細(xì)胞核仁區(qū)無(wú)熒光染色。當(dāng)標(biāo)本中抗體濃度過(guò)高時(shí)，部分標(biāo)本可見(jiàn)分裂間期HEp－2細(xì)胞核膜內(nèi)緣熒光染色加強(qiáng)，產(chǎn)生周邊型熒光染色。分裂期HEp－2細(xì)胞的濃縮染色體呈均勻著染，染色體區(qū)外周細(xì)胞核漿熒光染色陰性。分裂間期或者分裂期HEp－2細(xì)胞漿無(wú)熒光染色。均質(zhì)型對(duì)應(yīng)的靶抗原主要為染色體成分，如抗雙鏈DNA(double stranded DNA, ds－DNA)抗體、組蛋白、核小體等，與致密斑點(diǎn)型的臨床意義完全不同，為了避免誤導(dǎo)臨床醫(yī)生，在臨床診療工作中鑒別兩種熒光模型分別報(bào)告非常重要。

2．斑點(diǎn)型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿呈細(xì)顆粒、粗顆粒或大顆粒型熒光染色，核仁區(qū)陰性或者部分熒光著染[例如存在抗干燥綜合征抗原B (Sjogren's syndrome antigen B, SS－B)抗體或抗Ku抗體時(shí)]；分裂期HEp－2細(xì)胞的濃縮染色體無(wú)熒光染色，染色體區(qū)外可顯示顆粒型熒光染色。致密斑點(diǎn)型分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿呈現(xiàn)細(xì)顆粒型致密的熒光染色，分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)為強(qiáng)的顆粒狀熒光染色，染色體區(qū)域外為陰性。此熒光核型見(jiàn)于抗致密細(xì)顆粒－70抗體，其靶抗原為晶狀體上皮細(xì)胞衍生生長(zhǎng)因子和(或)DNA結(jié)合轉(zhuǎn)錄共激活因子p75，該抗體可見(jiàn)于各種AID、慢性感染性疾病、慢性疲勞綜合征及健康人群。

3．著絲點(diǎn)型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿呈現(xiàn)大小一致、明亮的點(diǎn)狀熒光均勻散布于細(xì)胞核，數(shù)量一般為40～60個(gè)，核仁常無(wú)熒光染色，有時(shí)也可見(jiàn)點(diǎn)狀熒光聚集于核仁區(qū)域。分裂期HEp－2細(xì)胞點(diǎn)狀或顆粒狀熒光集中于濃縮的染色體區(qū)，呈現(xiàn)"棒狀"或"帶狀"熒光染色。此熒光模型的靶抗原主要針對(duì)著絲粒染色體相關(guān)蛋白。

4．核多點(diǎn)型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿常呈現(xiàn)6～20個(gè)(平均10個(gè))分散大小不一的點(diǎn)狀熒光染色，核仁不染色。分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)陰性，但在染色體以外的范圍有時(shí)可見(jiàn)散在的顆粒熒光。其相關(guān)靶抗原包括PML、Sp100及MJ/NXP－2。

5．核少點(diǎn)型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿常呈現(xiàn)1～6個(gè)點(diǎn)狀熒光染色，常靠近核仁區(qū)。分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)陰性。其相關(guān)靶抗原包括p80－螺旋蛋白和運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元生存蛋白。

6．細(xì)胞核核仁型：

主要指分裂間期HEp－2細(xì)胞的核仁熒光染色模型，該類熒光模型也屬必報(bào)熒光模型。在有經(jīng)驗(yàn)的自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，核仁型可進(jìn)一步報(bào)告為核仁均質(zhì)型、核仁斑片型和核仁顆粒型。核仁均質(zhì)型為分裂間期HEp－2細(xì)胞整個(gè)核仁呈現(xiàn)均勻熒光染色，核漿可有相對(duì)較弱的彌漫性熒光染色；分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)陰性，在染色體區(qū)外圍可呈現(xiàn)彌漫性熒光染色。核仁斑片型，分裂間期HEp－2細(xì)胞核仁呈現(xiàn)明亮大顆粒熒光染色，常融合成片狀，細(xì)胞核漿無(wú)熒光染色；分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體陰性，染色體外圍呈不規(guī)則環(huán)狀熒光染色。核仁顆粒型，分裂間期HEp－2細(xì)胞核仁呈現(xiàn)點(diǎn)狀熒光染色，核漿無(wú)熒光染色；分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)陰性，核仁形成區(qū)可見(jiàn)明亮的點(diǎn)狀熒光，胞漿可呈現(xiàn)弱的彌漫性熒光染色。

7．細(xì)胞核膜型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞的核膜呈現(xiàn)光滑核膜型或點(diǎn)狀核膜型，而分裂中期赤道板無(wú)熒光，不同的熒光模型針對(duì)不同的特異性自身抗體及具有不同的臨床意義。

8．多形性熒光模型：

主要包括抗增殖細(xì)胞核抗原型(proliferating cell nuclear antigen，PCNA型)和著絲點(diǎn)－F型。PCNA熒光模型的特點(diǎn)是在HEp－2細(xì)胞核漿中見(jiàn)大小不一的斑點(diǎn)型熒光，在S期HEp－2細(xì)胞核漿中見(jiàn)熒光強(qiáng)度和顆粒最大的熒光染色，在S期的后期和G2期的早期，熒光斑點(diǎn)逐漸稀疏，核仁可呈熒光染色。G1期細(xì)胞和中期細(xì)胞通常不染色。著絲點(diǎn)－F型，分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿中呈現(xiàn)細(xì)顆粒狀熒光染色，核仁無(wú)熒光染色。G2期為強(qiáng)的熒光染色，而G1期無(wú)熒光染色或弱的熒光強(qiáng)度。著絲粒染色僅出現(xiàn)在前中期和中期HEp－2細(xì)胞，呈現(xiàn)多個(gè)對(duì)齊的小、弱的點(diǎn)狀熒光。前中期細(xì)胞的細(xì)胞核膜常呈現(xiàn)較弱的熒光染色。分裂期HEp－2細(xì)胞漿周圍為典型的彌漫性熒光染色。而部分著絲點(diǎn)F型也可見(jiàn)中間體熒光染色。

三、細(xì)胞漿熒光模型

細(xì)胞漿熒光模型主要包括5大類：胞漿纖維型、胞漿顆粒型、線粒體型、高爾基體型和棒環(huán)狀熒光模型。這5大類核型被認(rèn)為是臨床診療日常工作中必須報(bào)告的熒光模型，每大類所包含的具體熒光模型可由有經(jīng)驗(yàn)的自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室選擇報(bào)告。

1．胞漿纖維型：

包括線狀、絲狀及片段狀熒光模型。胞漿線狀纖維型熒光模型的特征是HEp－2細(xì)胞骨架纖維，部分有小的、不連續(xù)的顆粒狀沉淀的熒光染色，其主要的靶抗原為位于細(xì)胞長(zhǎng)軸方向的橫紋肌肌動(dòng)蛋白。胞漿絲狀纖維型熒光模型為核膜擴(kuò)散出的細(xì)絲和纖維，通常集中于細(xì)胞核周邊并擴(kuò)展到細(xì)胞漿，其主要的靶抗原為波形蛋白和細(xì)胞角蛋白。片段狀胞漿纖維型熒光模型為沿應(yīng)力纖維呈小片段、規(guī)律分布的致密性熒光增強(qiáng)小體，其主要的靶抗原包括α－輔肌動(dòng)蛋白、紐蛋白和原肌球蛋白。

2．胞漿顆粒型：

包括胞漿散點(diǎn)型、胞漿致密顆粒型和胞漿細(xì)顆粒型。胞漿散點(diǎn)型為分裂間期HEp－2細(xì)胞漿呈現(xiàn)大小不等、數(shù)量及分布不均的明顯顆粒狀熒光染色，靶抗原包括甘氨酸/色氨酸(glycine－and tryptophan，GW)體、溶酶體、早期內(nèi)涵體抗原1及胞漿聯(lián)接蛋白等。胞漿致密顆粒型為分裂間期HEp－2細(xì)胞漿呈現(xiàn)接近均質(zhì)型的致密細(xì)顆粒型熒光染色，靶抗原包括蘇氨酰－tRNA合成酶、丙氨酰－tRNA合成酶和核糖體P蛋白等。胞漿細(xì)顆粒型為分裂間期HEp－2細(xì)胞漿呈現(xiàn)細(xì)顆粒型熒光染色，靶抗原包括組氨酰轉(zhuǎn)移核糖核酸(transfer RNA，tRNA)合成酶等。

3．線粒體型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞漿呈現(xiàn)從細(xì)胞核邊緣延伸至整個(gè)細(xì)胞漿的不規(guī)則粗顆粒網(wǎng)狀熒光，細(xì)胞核和核仁陰性。強(qiáng)陽(yáng)性時(shí)可導(dǎo)致細(xì)胞核呈顆粒狀熒光染色。分裂期HEp－2細(xì)胞濃縮的染色體區(qū)陰性，染色體周圍呈致密的粗顆粒樣熒光染色。

4．高爾基體型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞漿毗鄰細(xì)胞核的一端或者圍繞核周呈現(xiàn)大小不均的顆粒型熒光染色。靶抗原高爾基－95/GW130、高爾基－97、高爾基－160和高爾基－245等。

5．棒環(huán)狀熒光模型：

分裂間期HEp－2細(xì)胞漿毗鄰細(xì)胞核的一端呈現(xiàn)圓環(huán)狀(直徑2～5 mm)或者棒狀(長(zhǎng)度3～10 mm)熒光染色，其主要的靶抗原為次黃嘌呤5'磷酸鹽脫氫酶2。

四、細(xì)胞有絲分裂期熒光模型

細(xì)胞有絲分裂期熒光模型指與細(xì)胞有絲分裂密切相關(guān)的熒光染色模型。主要包括中心體型、紡錘體纖維型、分離帶型和染色體型。

1．中心體型：

分裂中期HEp－2細(xì)胞染色體區(qū)兩極(紡綞體頂部位置)呈現(xiàn)明亮的圓點(diǎn)狀熒光染色，有絲分裂后期兩個(gè)熒光亮點(diǎn)位于細(xì)胞的兩端，分裂間期HEp－2細(xì)胞漿常呈現(xiàn)單個(gè)圓點(diǎn)狀熒光染色，熒光圓點(diǎn)靠近核膜。其靶抗原包括多種成分，如烯醇化酶、中心粒周圍蛋白、中心體相關(guān)蛋白(centrosome－associated protein，Cep)250、Cep110等。

2．紡錘體纖維型：

分裂期HEp－2細(xì)胞紡錘體兩極間呈現(xiàn)纖維絲狀熒光染色，特別是中期細(xì)胞呈現(xiàn)明亮、完整的紡錘體纖維絲狀熒光，分裂末期細(xì)胞間橋的邊緣有熒光染色，部分中間體區(qū)域可見(jiàn)熒光，分裂間期細(xì)胞常無(wú)熒光染色。靶抗原包括相對(duì)分子質(zhì)量130 000驅(qū)動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白，參與有絲分裂微管組裝的驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白。細(xì)胞核有絲分裂復(fù)合物熒光模型是紡錘體纖維型的一種亞型。在分裂間期HEp－2細(xì)胞核漿呈現(xiàn)明亮的致密細(xì)顆粒斑點(diǎn)型，核仁無(wú)熒光染色；分裂中期和后期在紡錘體兩極及紡錘體纖維的近端部分呈現(xiàn)出強(qiáng)的熒光染色，也被描述為三角形或香蕉形的熒光染色；分裂末期HEp－2細(xì)胞間橋無(wú)熒光染色。靶抗原為相對(duì)分子質(zhì)量210 000的親中心體蛋白。

3．細(xì)胞橋聯(lián)型：

受細(xì)胞分裂周期影響該核型熒光表現(xiàn)各異，核分裂末期和胞質(zhì)分裂期熒光位于分裂溝、收縮環(huán)、中間體和干體區(qū)。盡管在分裂間期熒光表現(xiàn)各異，但在前期和中期熒光表現(xiàn)為，染色體區(qū)垂直于赤道板的細(xì)拉鏈條索狀熒光，在分裂末期，通常表現(xiàn)為兩子代細(xì)胞交界處分裂溝的兩個(gè)局限性亮點(diǎn)。在S期和G2期可表現(xiàn)為散在不均的核斑點(diǎn)狀熒光。中間體是指胞核分裂期兩子代細(xì)胞分離時(shí)形成的有絲分裂區(qū)域，分裂后期中心紡錘體和分裂末期中間區(qū)域。此共識(shí)中推薦的中間體型專指細(xì)胞中間體著色，即細(xì)胞橋聯(lián)中間部分著色。中間體由150多種結(jié)構(gòu)蛋白和動(dòng)力蛋白組成。肌動(dòng)蛋白14抗體熒光模型表現(xiàn)為中間體和中間帶特異性熒光。中間體中心可見(jiàn)隆起的干體。盡管靶抗原尚未完全確認(rèn)，但促使著絲粒黏附于紡錘體的Aurora激酶B，可能會(huì)是其中一種抗原。其他的分子，比如著絲粒蛋白E(centromere protein E，CENP－E)、裂殖子表面抗原2(merozoite surface antigen 2，MSA－2)、驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白14，有絲分裂驅(qū)動(dòng)蛋白樣蛋白1據(jù)報(bào)道也可能是中間體蛋白。

4．染色體型：

分裂前期和中期HEp－2細(xì)胞濃縮染色體呈現(xiàn)細(xì)顆粒狀熒光染色，濃縮染色體內(nèi)和分裂間期細(xì)胞核漿無(wú)熒光染色^[8]。但是，該型抗原及臨床意義并未見(jiàn)報(bào)道。

五、抗核抗體HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光檢測(cè)結(jié)果報(bào)告

在2014年8月28日巴西圣保羅舉行第一屆ANA ICAP的基礎(chǔ)上，2015年在德國(guó)德累斯頓舉行了第二屆ICAP大會(huì)。本次會(huì)議討論了ANA在AID診療中的重要性，并形成了ANA檢測(cè)結(jié)果報(bào)告共識(shí)^[9]。在第二屆ICAP大會(huì)ANA結(jié)果報(bào)告共識(shí)形成過(guò)程中，充分討論并形成了2種可供自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室選擇的ANA結(jié)果報(bào)告形式。2種ANA結(jié)果報(bào)告形式都認(rèn)為一份完整的ANA結(jié)果報(bào)告應(yīng)該包括：ANA的檢測(cè)方法、定性結(jié)果、ANA核型和滴度(采用IIF)以及對(duì)臨床醫(yī)生的相關(guān)建議。2種ANA結(jié)果報(bào)告形式的區(qū)別在于，其中一種將HEp－2細(xì)胞胞漿熒光模型及細(xì)胞有絲分裂期熒光模型納入ANA陽(yáng)性結(jié)果，而另一種將HEp－2細(xì)胞胞漿熒光模型及細(xì)胞有絲分裂期熒光模型納入ANA陰性結(jié)果。ANA檢測(cè)結(jié)果報(bào)告共識(shí)中建議的ANA檢測(cè)結(jié)果報(bào)告范例見(jiàn)表1。

首先，ANA的檢測(cè)報(bào)告中應(yīng)明確標(biāo)明ANA的檢測(cè)方法，如HEp－2細(xì)胞IIF法，或者其他檢測(cè)方法如ELISA、熒光免疫微球等；由于不同試劑廠家提供的熒光檢測(cè)試劑可能影響不同的熒光模型，有條件的實(shí)驗(yàn)室可以同時(shí)注明檢測(cè)方法對(duì)應(yīng)的試劑廠家。其次，ANA的檢測(cè)報(bào)告中應(yīng)明確標(biāo)明ANA的定性結(jié)果(陽(yáng)性或者陰性)，采用IIF法的ANA結(jié)果隨后應(yīng)標(biāo)明熒光模型和滴度或者熒光強(qiáng)度(采用熒光自動(dòng)判讀儀器時(shí))；采用ELISA等其他檢測(cè)方法的ANA結(jié)果隨后應(yīng)標(biāo)明檢測(cè)結(jié)果的定量數(shù)值。對(duì)于采用IIF檢測(cè)ANA結(jié)果如果遇到混合核型時(shí)，核型的報(bào)告優(yōu)先級(jí)順序?yàn)榧?xì)胞核熒光模型、細(xì)胞漿熒光模型、細(xì)胞有絲分裂期熒光模型。相同優(yōu)先級(jí)的熒光模型，按滴度高低順序依次報(bào)告。第三，該共識(shí)推薦在ANA的檢測(cè)報(bào)告中應(yīng)注明相關(guān)臨床建議。

六、討論

ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型命名標(biāo)準(zhǔn)化國(guó)際共識(shí)將ANA熒光模型分為必報(bào)熒光模型(基礎(chǔ)水平報(bào)告熒光模型)和選報(bào)熒光模型(專家級(jí)水平報(bào)告熒光模型)的逐級(jí)報(bào)告模式是比較合理和實(shí)用的。對(duì)于國(guó)內(nèi)自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員，剛開(kāi)展ANA－IIF檢測(cè)或者經(jīng)驗(yàn)不足的自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，可進(jìn)行較低等級(jí)的ANA熒光模型報(bào)告。對(duì)于經(jīng)驗(yàn)豐富的自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室，為了給臨床醫(yī)生提供更豐富的檢測(cè)信息，非常有必要進(jìn)行更詳細(xì)的ANA熒光模型報(bào)告，而不能僅停留于如細(xì)胞核斑點(diǎn)型或者細(xì)胞胞漿型的核型大類報(bào)告。值得國(guó)內(nèi)自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員重視的是ANA HEp－2細(xì)胞間接免疫熒光染色模型命名標(biāo)準(zhǔn)化國(guó)際共識(shí)中將細(xì)胞核致密斑點(diǎn)型(dense fine speckled，DFS)作為必報(bào)熒光模型，而國(guó)內(nèi)自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室人員對(duì)該熒光模型認(rèn)識(shí)嚴(yán)重不足，常將DFS作為細(xì)胞核均質(zhì)型或者細(xì)胞核斑點(diǎn)型報(bào)告。隨著對(duì)DFS的認(rèn)識(shí)不斷深入，DFS的臨床意義與細(xì)胞核均質(zhì)型或者細(xì)胞核斑點(diǎn)型完全不同，中高滴度的細(xì)胞核均質(zhì)型或者細(xì)胞核斑點(diǎn)型提示自身免疫性疾病的可能性較大，而DFS并不作為自身免疫性疾病存在的標(biāo)志。因此為了避免給臨床醫(yī)生帶來(lái)誤導(dǎo)，在臨床檢測(cè)工作中將該模型區(qū)別出來(lái)單獨(dú)報(bào)告具有重要意義。

基于目前國(guó)際上對(duì)ANA概念理解的不同(細(xì)胞漿熒光模型，細(xì)胞有絲分裂期熒光模型是否應(yīng)該作為ANA陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告)，以及現(xiàn)有各種AID診療指南中納入的ANA結(jié)果實(shí)質(zhì)范疇，ICAP大會(huì)提出了2種可供自身抗體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室選擇的ANA結(jié)果報(bào)告形式。一方面，我們需要認(rèn)識(shí)到越來(lái)越多的學(xué)者將ANA的定義從針對(duì)細(xì)胞核成分的抗體擴(kuò)展到針對(duì)整個(gè)細(xì)胞成分的抗體。而且無(wú)論是ACR還是EASI/國(guó)際免疫協(xié)會(huì)聯(lián)盟(International Union of Immunological Societies，IUIS)指南都接受除IIF法以外的其他方法如ELISA作為ANA檢測(cè)的備選方法，但是這些方法檢測(cè)ANA時(shí)，都會(huì)包含針對(duì)細(xì)胞漿成分的抗體，如組氨酰tRNA合成酶抗原(Jo－1 antigen，Jo－1)、核糖體P蛋白等，因此基于IIF法與這些備選方法檢測(cè)結(jié)果的一致性，應(yīng)該將IIF法檢測(cè)ANA時(shí)的細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂期熒光模型作為ANA陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告。另一方面，由于ANA的傳統(tǒng)定義只將ANA定義為針對(duì)細(xì)胞核成分的抗體，所以目前納入系統(tǒng)性紅斑狼瘡^[10,11]、干燥綜合征^[12]、混合型結(jié)締組織病^[13]、系統(tǒng)性硬化癥^[14]和自身免疫性肝炎^[15]等許多AID疾病診斷指南中的ANA不包括細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂期熒光模型，因此基于目前的疾病診療指南，如果將細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂期熒光模型納入到ANA陽(yáng)性結(jié)果，可能會(huì)影響到相關(guān)疾病診療指南的臨床應(yīng)用。如在AIH的診斷標(biāo)準(zhǔn)評(píng)分體系中，ANA陽(yáng)性根據(jù)不同滴度可獲得1～3分，而細(xì)胞漿熒光模型的抗線粒體抗體陽(yáng)性則會(huì)減去4分，因此在此類疾病診療指南中，將細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂期熒光模型作為ANA陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告勢(shì)必影響到相關(guān)指南的臨床應(yīng)用。此外，一些全球性的室間質(zhì)評(píng)系統(tǒng)中仍將細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂期熒光模型作為ANA陰性結(jié)果處理，如英國(guó)國(guó)家室間質(zhì)評(píng)服務(wù)(United Kingdom National External Quality Assessment Service，UK－NEQAS)。因此，基于上述存在的問(wèn)題，目前的ANA結(jié)果報(bào)告國(guó)際共識(shí)推薦2種形式。如果將來(lái)ANA結(jié)果報(bào)告中細(xì)胞漿熒光模型和細(xì)胞有絲分裂期熒光模型作為ANA陽(yáng)性結(jié)果報(bào)告達(dá)到國(guó)際共識(shí)，必將引起一些現(xiàn)有的室間質(zhì)評(píng)評(píng)分系統(tǒng)和AID疾病的診療指南的修改和更新。

ANA檢測(cè)結(jié)果報(bào)告共識(shí)建議ANA檢測(cè)結(jié)果報(bào)告應(yīng)注明相關(guān)臨床建議。國(guó)內(nèi)自身抗體檢測(cè)工作者在臨床實(shí)踐工作中常疏忽了這方面。由于針對(duì)特異性靶抗原對(duì)應(yīng)的自身抗體是診斷自身免疫病的重要依據(jù)，因此在熒光模型中如果高度懷疑存在針對(duì)某個(gè)疾病特異性靶抗原的自身抗體存在時(shí)，應(yīng)建議臨床醫(yī)生進(jìn)一步進(jìn)行該特異性抗體的檢測(cè)。ANA檢測(cè)結(jié)果報(bào)告中注明重要臨床建議有助于臨床醫(yī)生及時(shí)準(zhǔn)確地提出下一步檢測(cè)需求，有助于患者疾病的及時(shí)正確診斷和治療。

ANA的滴度是ANA檢測(cè)結(jié)果的重要組成部分，對(duì)臨床疾病診斷和病情評(píng)估有重要價(jià)值。在本共識(shí)解讀成文及審稿過(guò)程中也有許多專家提及ANA滴度的重要性。由于ANA檢測(cè)的滴度問(wèn)題非常復(fù)雜，在ANA報(bào)告國(guó)際共識(shí)中僅提及需要報(bào)告滴度，但并未對(duì)怎樣報(bào)告滴度，采用何種滴度系統(tǒng)(傳統(tǒng)倍比稀釋系統(tǒng)或者10開(kāi)方的稀釋系統(tǒng))進(jìn)行詳細(xì)明確闡述。在我國(guó)，ANA檢測(cè)的滴度問(wèn)題實(shí)際情況更為復(fù)雜：(1)采用傳統(tǒng)倍比稀釋系統(tǒng)試劑，倍比稀釋系統(tǒng)報(bào)告滴度；(2)采用10開(kāi)方的稀釋系統(tǒng)試劑，倍比稀釋系統(tǒng)報(bào)告滴度；(3)10開(kāi)方的稀釋系統(tǒng)試劑，10開(kāi)方的稀釋系統(tǒng)報(bào)告滴度。我們期待在后續(xù)的相關(guān)專家述評(píng)或者將來(lái)建立該領(lǐng)域國(guó)內(nèi)共識(shí)的時(shí)候?qū)NA滴度實(shí)驗(yàn)的建立、質(zhì)控及稀釋原則等重要臨床問(wèn)題進(jìn)行詳細(xì)討論并逐一明確。

隨著對(duì)ANA臨床意義的認(rèn)識(shí)不斷深入，越來(lái)越多的臨床工作者重視ANA檢測(cè)，ANA檢測(cè)的方法和結(jié)果報(bào)告的形式將在國(guó)際范圍內(nèi)逐步規(guī)范^[16]，該舉措必將進(jìn)一步促進(jìn)ANA檢測(cè)質(zhì)量的提高和充分發(fā)揮ANA在AID臨床診療中的價(jià)值。